传代

 

1、贴壁细胞传代时，先用消化液润洗一遍；弃掉后，再加入适量消化液置于孵箱或镜下观察消化；当细胞变圆，彼此之间产生空隙，加入等量或大量的培养基终止消化，培养基中的血清可以抑制胰蛋白酶的活性。

2、这里我没有明确提到胰蛋白酶的浓度，并不是说浓度越高越好。胰蛋白酶底物的特异性差，会破坏细胞膜成分。PH8.0，37度环境下，消化液的消化能力是很强的。培养基中的血清会降低胰酶的消化能力，所以每次消化前，也要用PBS反复冲洗干净培养皿。日常用的比较多的消化液浓度：a)0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

b)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA

c)0.25%胰蛋白酶

3、传代后如果细胞不贴壁，可能的原因是胰蛋白酶消化过度或者没有清洗干净EDTA。

4、悬浮细胞传代时，正常收集细胞、离心浓缩、用培养基重悬就可以了。悬浮细胞每次换液都需要离心重悬，但是由于悬浮细胞一般会处于单细胞层生长，有的时候生长速度很快，重悬后如果不晃动培养皿，就会看到细胞成团；如果经常显示悬浮细胞大量抱团生长，也有可能是培养基中的血清问题、或者钙镁离子浓度的变化造成了细胞间的粘附力改变。

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