培养基

1、培养基的选择依细胞种类而定。如果是从别的实验室借来的细胞，最初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。

2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。

3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。

4、细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4，偏高或偏低都不好，但相对于碱性条件而言，细胞更耐酸。原代细胞对PH值的变化很敏感，而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。

5、造成皿或瓶内培养基PH值变化的原因有很多：细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准确、培养瓶的盖子拧紧或者发生了污染。如果发现细胞生长过慢，刨除细胞本身状态的原因，可以在培养液中添加丙酮酸钠（丙酮酸钠是糖酵解的中间产物，为细胞生长提供ATP，提供合成大代谢所需要的碳源，使用浓度通常是0.1mM）。

6、细胞发生污染，培养基的PH值也会发生变化。如果新配置的培养基出现沉淀，很可能是广口瓶没有清洗干净，瓶中残留的磷酸盐造成培养基成分的析出。

7、孵箱内湿度对维持培养基的渗透压也有很重要的作用。大部分细胞适应的渗透压在260-320mOsm/kg。湿度不够时，培养基蒸发，液体的渗透压就会升高。

8、培养基在使用前需提前从冰箱拿出，使其恢复至室温或者37度水浴。

9、操作过程中，如果枪头中已经有培养基或其他液体成分，不要再经过酒精灯被高温加热。高温不仅会使有效成分失效，更有可能产生有毒物质。

10、我们购买的培养基瓶上都会标注避光保存，这是因为培养基中的某些成分遇光会产生过氧化氢，具有细胞毒性。我们在超净台中处理细胞时，因为时间较短，不会产生太大问题。但是如果长时间放置在室外或灯光下照射，或者有的冷藏冰柜的门是玻璃的，就会造成培养基质量的下降。

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