细胞死亡及生长异常

1、首先讲一下细胞生长缓慢的原因：

a)更换了血清或者培养基，细胞需要一段时间适应一下；

b)由于细胞的特殊种类，培养基中缺少某些生长因子；

c)培养基中有少量真菌或者细菌污染；

d)传代的时候细胞密度过低；

e)细胞状态老化；

f)支原体污染。

2、解决上述问题的方法：

a)如果实验室没有某种细胞最适宜的培养基，可以先用原培养条件冻存一些，然后逐渐增加新的培养基比例，25%、50%、75%到100%，传代3-5次后，让细胞慢慢适应。

b)判断是不是培养基发生污染，可以先不加抗生素，观察细胞状态。

c)增加细胞的接种密度。

d)发现细胞老化的时候，及时更换新的细胞。

e)如果怀疑是支原体污染，一定要隔离疑似污染的培养皿，及时清洁消毒孵箱。

3、造成细胞死亡的原因：

a)细胞消化过度；

b)没有及时换液，营养成分消耗殆尽；

c)如果前一天细胞的状态很好，换液之后就全死了，应该考虑是否是培养基或者血清的问题。

4、如何判定细胞是否发生支原体污染：可以选用直接培养法、荧光染色或PCR方法检测，比较常用的是PCR。当细胞发生支原体污染时，原则上是能够去除支原体的，但是整个过程耗时耗力，还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下，建议发现污染时立刻弃掉，重新培养。

5、如果孵箱中只是某种细胞持续性大量死亡，而其他细胞状态都没问题的话，基本上可以确定就是孵箱存在特异性感染这类细胞的真菌或细菌，遇到这种情况，小六儿也不知道该怎么做，只能是先停一段时间看看。。。。。。

6、其他注意事项：每个星期都要更换孵箱底盘中的水（紫外照射后超纯水）；每两周消毒一次孵箱：75%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新洁尔灭擦拭一遍（都用超纯水配制）；可以在孵箱底部放一个烧杯，里面放入饱和硫酸铜，可以抑制霉菌生长。不过也有人说硫酸铜会改变孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情况很严重，建议不要使用。

科研实验中，细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好，就要用好血清，如Ausbian®特级胎牛血清，它适合各种细胞培养，尤其适合难养细胞，如：干细胞、肝细胞，神经细胞，原代培养、细胞融合、转染细胞等。

Ausbian®特级胎牛血清所有血清出厂前，均经过严格质控，每个批次附有详细完整的《检测报告》，包括：品名，货号，批号，血源地，生产日期，保质期，pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查（细菌、真菌、支原体）、病毒检查（如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等）、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。

实验人对于新批次血清，应认真审阅《检测报告》，做好试用前筛选第一步。（如何看懂《检测报告》，可登陆“缔一生物"网站，留言技术部，得到免费帮助。）

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