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给实验室新同学们的一些必读知识

更新时间:2021-11-12  |  点击率:723

细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。

一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。

细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。动物细胞无细胞壁,细胞质中常有中心体,而高等植物细胞中则无。细胞有运动、营养和繁殖等机能。

科研实验中,细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好,就要用好血清,如Ausbian®特级胎牛血清,它适合各种细胞培养,尤其适合难养细胞,如:干细胞、肝细胞,神经细胞,原代培养、细胞融合、转染细胞等。

其实,刚刚复苏的细胞就像是刚刚出生的baby,非常脆弱,需要各位小伙伴的细心呵护,不然,细胞就会被我们花样玩死。为了避免细胞不明不白的挂掉,我们就要对细胞的各种习性了如指掌。

1. 俗语道,到什么山上唱什么歌,不同细胞用不同的培养液。此时,就不得不提起培养基里的“四大金刚"—MEM、DMEM、1640、F-12,它们基本参与了90%以上种类细胞的培养过程。

MEM作为带头大哥,能力非常全面,号称是应用*泛的细胞培养液。

DMEM作为随时紧跟老大MEM的二弟,青出于蓝而胜于蓝,浓度要高出2~4倍,可分为高糖型(含葡萄糖4500mg/L)和低糖型(含葡萄糖1000mg/L)。

老三1640中规中矩,营养成分比较简单,比DMEM少一点糖和谷光甘肽,常用于淋巴细胞的培养。

小兄弟F12常用来支持CHO、Hela和L-细胞生长以及原代大鼠肝细胞和前列腺上皮细胞的培养。MEM和F12 这两种培养基各取1/2,即可形成神经生物学通用的培养基。

2. 细胞生长的空间密度是细胞培养的关键。具体养细胞时应该摸索细胞喜欢的生长空间密度,既不能让细胞瓶里的细胞因拥挤不堪而萎靡不振;也不能让细胞浓度低于1~5×10^5个/mL而导致“孤独死"(因为细胞的健康生长需要细胞间的连接)。因而细胞接种前,要先通过细胞计数来调整细胞浓度。

3. 当培养的贴壁细胞形态不好时,可在传代时,先倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清都可以)洗涤一次,用滴管吸走,再加入3ml培养基,沿着瓶底轻轻吹打一遍,然后吸走。这时在正式进行消化、吹打。

其次,把吹打下的细胞悬液加入到含有新培养基的培养瓶内,置于培养箱里培养,按时间点观察细胞贴壁情况(10min,20min,30min)。而后迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次,然后加入*培养基培养并观察细胞生长情况以及形态。直至找到细胞wan美的形态为止。

4. 至于在培养瓶中加入多少培养基量,则是需要实验汪们自己去摸索的。对于生长快的细胞,易生长的细胞加少一点培养基,细胞形态会更好,但是要注意对换液时间的把握。

5. 如何选择培养瓶。一般,生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态,那么采用塑料瓶会比玻璃瓶的效果好;生长速度快的细胞,用玻璃瓶培养的效果会更好。因此,对于同一种细胞,在其生长速度慢的时候(比如细胞刚复苏时或者原代培养),塑料瓶会好一点;而在其生长旺盛的时候,玻璃瓶则相对会好一点。

6. 细胞冻存时,盖子要拧紧,不然复苏水浴时会渗水,造成细胞污染。因而冻存管要选择原配的管子和盖子(不同牌子、型号的管子会有差别),盖子拧紧后最好用封口膜封住。且每支冻存管都要标上细胞的名称、冻存时间,并记录在册,以免后续复苏细胞时,取错细胞。

7. 细胞冻存时要严格进行梯度降温(-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮)。要知道冰火两重天的生活环境只会让娇弱的细胞自爆身亡,谨记:缓降温!但如果真心赶时间时,可以使用细胞冻存盒进行细胞冻存,而后尽快将其转入液氮中。此外,要定期测量液氮罐里的液氮储备,以保证细胞全部浸在液面下。

8. 细胞解冻时,由于冻存管管壁较厚、隔热,而导致水浴时间太长(2min还没融化)时,可以将水浴锅的温度调至40℃左右,可以缩短解冻时间。

9. 提前预定超净台,减少复苏后插在冰盒里等待的时间,可避免细胞房人满为患,超净台使用紧张,复苏1h后,还没有加入新的培养液。(高浓度DMSO防止胞内形成冰晶,冻存时保护细胞,但复苏融解后,浸泡时间太久会对细胞有毒性)

10. 复苏细胞时一定要有耐心,因为有些细胞在复苏一星期后才会真正有起色。因而,尽管细胞在复苏三四天后没有任何动静,也不要轻易倒掉所有细胞,要耐心等待,两周后再做决定。

11. 有关DMSO的一些注意事项:

(1) DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内的离子浓度、减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤程度。

(2) DMSO在溶解过程中会放热,应先与培养基混匀后再加血清,同时冻存液最好提前配置,DMSO现配对细胞的毒性可能更大;

(3) 复苏时,要离心去除DMSO,并用新鲜的培养基洗涤1-2次,注意离心的时候速度不要太快。

Ausbian®特级胎牛血清所有血清出厂前,均经过严格质控,每个批次附有详细完整的《检测报告》,包括:品名,货号,批号,血源地,生产日期,保质期,pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内毒素、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病毒检查(如BVD、牛腺病毒、细胞病变效应等)、促细胞生长能力、细胞毒性、BVD-1/2抗体检查等。

实验人对于新批次血清,应认真审阅《检测报告》,做好试用前筛选第一步。(如何看懂《检测报告》,可登陆“缔一生物"网站,留言技术部,得到免费帮助。)

它在国内市场经历十几年,被众多科研工业客户反复选择,也是细胞典藏等重大项目十几年的供应品牌.


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