研究揭示miR-133a的转录调控机制及其在细胞分化中的作用

9月9日，学术期刊Cell Death & Disease发表了中国科学院生物物理研究所卫涛涛课题组与美国Creighton大学屠亚平课题组的合作论文，这是卫涛涛课题组与屠亚平课题组长期合作所取得的又一成果。研究人员发现，miR-133a表达的上调促进了线粒体生物发生和肌细胞分化，并进一步通过“定向染色质构象捕获”（CAPTURE）技术找到了调控miR-133a表达的上游调控因子KAP1，从而加深了对miR-133a转录调控机制及重要功能的了解。

microRNA（miRNA）在多种生理及病理生理过程中起着重要的调控作用。在前期工作中，卫涛涛课题组与屠亚平课题组密切合作，通过分子、细胞及动物实验证明，TGF-β1诱导表达的miR-133a可通过负反馈调节的方式作用于TGF-β1受体及其效应分子，负调控TGF-β1信号通路，从而抑制甚至部分逆转特发性肺纤维化（IPF）的进程，相关论文于2019年9月11日发表于Cell Death & Disease杂志。

鉴于miR-133a的重要生理及病理生理学作用，探明其调控机制将对治疗肺纤维化等相关疾病提供重要的线索。卫涛涛课题组与屠亚平课题组进一步以成肌细胞分化过程中miR-133a动态表达为模型，使用基于CRISPR/Cas9的CAPTURE技术，结合高通量测序及生物信息学分析，系统研究了miR-133a表达的调控机制，发现KAP1相关的转录调控复合物可抑制C2C12成肌细胞中miR-133a的表达；敲低KAP1可增加miR-133a的表达，此过程伴随线粒体生物发生和C2C12成肌细胞分化；miR-133a的上调足以诱导线粒体生物发生和C2C12成肌细胞分化，而miR-133a抑制剂则显着抑制细胞分化。

该研究*使用CAPTURE技术鉴定了细胞分化过程中调控miR-133a表达的重要因子，为理解microRNA的调控机制提供了新思路。

采用Ausbian进口特级胎牛血清，透析过滤去除10000D以下小分子（如次黄嘌呤和胸腺核苷），避免外源小分子对细胞产生干扰。适合脉冲示踪实验（例如同位素标记特定小分子，并加入到培养体系中，以研究细胞代谢），也适合转染CHO后的筛选等应用。

储存条件

-20°C冻存。

胎牛血清*解冻后，应按单次习惯用量分装，分装后的血清仍-20°C冻存。

若置于4°C的血清，应在一周内用完。

为保证细胞培养的效果，血清和培养基的配置，应遵循“现用现配”原则。配好的培养液，应于一周内用完。

血清避免反复冻融，避免在4°C或更高温度储存过久，否则会破坏血清中有效活性成分，影响血清品质。

血清融化 专业方法：

目的;更好保留血清中活性成分，使细胞培养更稳定。

推荐血清厂家 专业融化方法（此方法通用，适用于所有种类的血清）：

注意：

♦ 在水浴过程中，血清的平面要*浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动瓶身，使血清混匀，但摇动中尽量不要产生泡沫!